PCR ଆନାଲିଜର ତ୍ରୁଟି ନିବାରଣ: ବାରମ୍ବାର ପଚରାଯାଉଥିବା ପ୍ରଶ୍ନ ଏବଂ ସମାଧାନ |

ପଲିମେରେଜ୍ ଚେନ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା (PCR) ବିଶ୍ଳେଷକମାନେ ମଲିକୁଲାର ଜୀବବିଜ୍ଞାନରେ ଅତ୍ୟାବଶ୍ୟକ ଉପକରଣ, ଅନୁସନ୍ଧାନକାରୀଙ୍କୁ ଜେନେଟିକ୍ ଅନୁସନ୍ଧାନ ଠାରୁ ଆରମ୍ଭ କରି କ୍ଲିନିକାଲ୍ ଡାଇଗ୍ନୋଷ୍ଟିକ୍ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ପ୍ରୟୋଗଗୁଡ଼ିକ ପାଇଁ DNA ବୃଦ୍ଧି କରିବାକୁ ଅନୁମତି ଦିଅନ୍ତି | ତଥାପି, ଯେକ any ଣସି ଜଟିଳ ଉପକରଣ ପରି, ଏକ PCR ବିଶ୍ଳେଷକ ଏହାର କାର୍ଯ୍ୟଦକ୍ଷତାକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରୁଥିବା ସମସ୍ୟାର ସମ୍ମୁଖୀନ ହୋଇପାରେ | ଏହି ଆର୍ଟିକିଲ୍ ବିଷୟରେ କିଛି ସାଧାରଣ ପ୍ରଶ୍ନକୁ ସମ୍ବୋଧିତ କରେ |PCR ବିଶ୍ଳେଷଣକାରୀ |ତ୍ରୁଟି ନିବାରଣ ଏବଂ ସାଧାରଣ ସମସ୍ୟାର ବ୍ୟବହାରିକ ସମାଧାନ ପ୍ରଦାନ କରେ |

1। ମୋର PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା କାହିଁକି ବୃଦ୍ଧି କରୁନାହିଁ?

ଉପଭୋକ୍ତାମାନେ ସମ୍ମୁଖୀନ ହେଉଥିବା ଏକ ସାଧାରଣ ସମସ୍ୟା ହେଉଛି PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ଲକ୍ଷ୍ୟ DNA କୁ ବ ify ାଇବାରେ ଅକ୍ଷମତା | ଏହାକୁ ଅନେକ କାରଣ ପାଇଁ ଦାୟୀ କରାଯାଇପାରେ:

ଭୁଲ୍ ପ୍ରାଇମର୍ ଡିଜାଇନ୍: ନିଶ୍ଚିତ କରନ୍ତୁ ଯେ ଆପଣଙ୍କର ପ୍ରାଇମର୍ ଗୁଡିକ ଲକ୍ଷ୍ୟ କ୍ରମ ପାଇଁ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଏବଂ ଏକ ଉତ୍ତମ ତରଳିବା ତାପମାତ୍ରା (Tm) ଅଛି | ଅଜ୍ଞାତ ବନ୍ଧନକୁ ଏଡାଇବା ପାଇଁ ପ୍ରାଥମିକ ଡିଜାଇନ୍ ପାଇଁ ସଫ୍ଟୱେର୍ ଉପକରଣଗୁଡିକ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ |

ପର୍ଯ୍ୟାପ୍ତ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ DNA: ଯାଞ୍ଚ କରନ୍ତୁ ଯେ ଆପଣ ପର୍ଯ୍ୟାପ୍ତ ପରିମାଣର ଟେମ୍ପଲେଟ୍ DNA ବ୍ୟବହାର କରୁଛନ୍ତି | ବହୁତ କମ୍ ଫଳାଫଳ ଦୁର୍ବଳ ହେବ କିମ୍ବା କ pl ଣସି ବିସ୍ତାର ହେବ ନାହିଁ |

ନମୁନାରେ ପ୍ରତିବନ୍ଧକ: ନମୁନାରେ ଥିବା ପ୍ରଦୂଷକ PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟାକୁ ପ୍ରତିରୋଧ କରିପାରେ | ଆପଣଙ୍କର DNA କୁ ଶୁଦ୍ଧ କରିବାକୁ କିମ୍ବା ଏକ ଭିନ୍ନ ନିଷ୍କାସନ ପଦ୍ଧତି ବ୍ୟବହାର କରିବାକୁ ଚିନ୍ତା କରନ୍ତୁ |

ସମାଧାନ: ଆପଣଙ୍କର ପ୍ରାଥମିକ ଡିଜାଇନ୍ ଯାଞ୍ଚ କରନ୍ତୁ, ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଏକାଗ୍ରତା ବୃଦ୍ଧି କରନ୍ତୁ, ଏବଂ ନିଶ୍ଚିତ କରନ୍ତୁ ଯେ ଆପଣଙ୍କର ନମୁନାରେ ପ୍ରତିବନ୍ଧକ ନାହିଁ |

2। ମୋର PCR ଉତ୍ପାଦ ଭୁଲ ଆକାର କାହିଁକି?

ଯଦି ଆପଣଙ୍କର PCR ଉତ୍ପାଦ ଆକାର ଆଶା କରାଯାଉ ନାହିଁ, ଏହା ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଅବସ୍ଥା କିମ୍ବା ବ୍ୟବହୃତ ଉପାଦାନ ସହିତ ଏକ ସମସ୍ୟା ସୂଚାଇପାରେ |

ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବିସ୍ତାର: ଯଦି ଏକ ପ୍ରାଇମର୍ ଏକ ଅବାଞ୍ଛିତ ସାଇଟ୍ ସହିତ ବାନ୍ଧେ ତେବେ ଏହା ହୋଇପାରେ | ବ୍ଲାଷ୍ଟ ଭଳି ଏକ ଉପକରଣ ବ୍ୟବହାର କରି ପ୍ରାଥମିକମାନଙ୍କର ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା ଯା Check ୍ଚ କରନ୍ତୁ |

ଭୁଲ୍ ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରା: ଯଦି ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରା ଅତ୍ୟଧିକ କମ୍, ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବନ୍ଧନ ହୋଇପାରେ | ଗ୍ରେଡିଏଣ୍ଟ୍ PCR ଦ୍ୱାରା ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରାର ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ |

ସମାଧାନ: PCR ଉତ୍ପାଦଗୁଡିକର ସଠିକତାକୁ ଉନ୍ନତ କରିବା ପାଇଁ ପ୍ରାଥମିକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା ନିଶ୍ଚିତ କରନ୍ତୁ ଏବଂ ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରାକୁ ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ କରନ୍ତୁ |

3। ମୋର PCR ଆନାଲିଜର୍ ଏକ ତ୍ରୁଟି ବାର୍ତ୍ତା ପ୍ରଦର୍ଶନ କରେ | ମୁଁ କଣ କରିବି?

ଏକ PCR ଆନାଲିଜରରେ ତ୍ରୁଟି ବାର୍ତ୍ତା ଉଦ୍ବେଗଜନକ ହୋଇପାରେ, କିନ୍ତୁ ସେମାନେ ପ୍ରାୟତ potential ସମ୍ଭାବ୍ୟ ସମସ୍ୟାର ସୂଚକ ପ୍ରଦାନ କରିପାରନ୍ତି |

କାଲିବ୍ରେସନ୍ ଇସୁ: ନିଶ୍ଚିତ କରନ୍ତୁ ଯେ PCR ଆନାଲିଜର୍ ସଠିକ୍ ଭାବରେ କାଲିବ୍ରେଟ୍ ହୋଇଛି | ସଠିକ୍ ଫଳାଫଳ ପାଇବା ପାଇଁ ନିୟମିତ ରକ୍ଷଣାବେକ୍ଷଣ ଏବଂ କାଲିବ୍ରେସନ୍ ଯାଞ୍ଚ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ |

ସଫ୍ଟୱେର୍ ଗ୍ରୁପ୍: ବେଳେବେଳେ, ସଫ୍ଟୱେର୍ ବଗ୍ ସମସ୍ୟା ସୃଷ୍ଟି କରିପାରେ | ଆପଣଙ୍କର କମ୍ପ୍ୟୁଟରକୁ ପୁନ Rest ଆରମ୍ଭ କରନ୍ତୁ ଏବଂ ସଫ୍ଟୱେର୍ ଅପଡେଟ୍ ପାଇଁ ଯାଞ୍ଚ କରନ୍ତୁ |

ସମାଧାନ: ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ତ୍ରୁଟି ସଂକେତ ପାଇଁ ଉପଭୋକ୍ତା ମାନୁଆଲକୁ ଅନୁସରଣ କରନ୍ତୁ ଏବଂ ପରାମର୍ଶିତ ତ୍ରୁଟି ନିବାରଣ ପଦକ୍ଷେପଗୁଡ଼ିକୁ ଅନୁସରଣ କରନ୍ତୁ | ନିୟମିତ ରକ୍ଷଣାବେକ୍ଷଣ ଅନେକ ସମସ୍ୟାକୁ ରୋକିପାରେ |

ମୋର PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଫଳାଫଳ କାହିଁକି ଅସଙ୍ଗତ?

ଅସଙ୍ଗତ PCR ଫଳାଫଳ ଅନେକ କାରଣରୁ ନିରାଶାଜନକ ହୋଇପାରେ:

ପୁନ ag ଗୁଣବତ୍ତା: ନିଶ୍ଚିତ କରନ୍ତୁ ଯେ ଏନଜାଇମ୍, ବଫର୍, ଏବଂ dNTP ସହିତ ସମସ୍ତ ରେଜେଣ୍ଟଗୁଡିକ ସତେଜ ଏବଂ ଉଚ୍ଚ ଗୁଣବତ୍ତା ଅଟେ | ମିଆଦ ପୂର୍ଣ୍ଣ କିମ୍ବା ଦୂଷିତ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାଗୁଡ଼ିକ ପରିବର୍ତ୍ତନଶୀଳତା ସୃଷ୍ଟି କରିପାରେ |

ଥର୍ମାଲ୍ ସାଇକ୍ଲର୍ କାଲିବ୍ରେସନ୍: ଅସଙ୍ଗତ ତାପମାତ୍ରା ସେଟିଂ PCR ପ୍ରକ୍ରିୟାକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରିପାରେ | ଥର୍ମାଲ୍ ସାଇକ୍ଲର କାଲିବ୍ରେସନ୍ ନିୟମିତ ଯାଞ୍ଚ କରନ୍ତୁ |

ସମାଧାନ: କ୍ରମାଗତ ଫଳାଫଳ ନିଶ୍ଚିତ କରିବାକୁ ଉଚ୍ଚ-ଗୁଣାତ୍ମକ ରିଜେଣ୍ଟସ୍ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ ଏବଂ ନିୟମିତ ଭାବରେ ଆପଣଙ୍କର ଥର୍ମାଲ୍ ସାଇକ୍ଲର୍ କାଲିବ୍ରେଟ୍ କରନ୍ତୁ |

PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଦକ୍ଷତାକୁ କିପରି ଉନ୍ନତ କରାଯିବ?

PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟାଗୁଡ଼ିକର କାର୍ଯ୍ୟଦକ୍ଷତାକୁ ଉନ୍ନତ କରିବା ଦ୍ୱାରା ଅଧିକ ଅମଳ ଏବଂ ଅଧିକ ନିର୍ଭରଯୋଗ୍ୟ ଫଳାଫଳ ହୋଇପାରେ |

ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଅବସ୍ଥାକୁ ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ କରନ୍ତୁ: ପ୍ରାଇମର୍, ଟେମ୍ପଲେଟ୍ DNA ଏବଂ MgCl2 ର ବିଭିନ୍ନ ଏକାଗ୍ରତା ବ୍ୟବହାର କରି ପରୀକ୍ଷଣ | ପ୍ରତ୍ୟେକ PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ଉତ୍କୃଷ୍ଟ କାର୍ଯ୍ୟଦକ୍ଷତା ପାଇଁ ଅନନ୍ୟ ସର୍ତ୍ତ ଆବଶ୍ୟକ ହୋଇପାରେ |

ଉଚ୍ଚ-ବିଶ୍ୱସ୍ତତା ଏନଜାଇମ୍ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ: ଯଦି ସଠିକତା ଗୁରୁତ୍, ପୂର୍ଣ୍ଣ, ବର୍ଦ୍ଧନ ସମୟରେ ତ୍ରୁଟି କମ୍ କରିବାକୁ ଏକ ଉଚ୍ଚ-ବିଶ୍ୱସ୍ତତା DNA ପଲିମେରେଜ୍ ବ୍ୟବହାର କରିବାକୁ ଚିନ୍ତା କରନ୍ତୁ |

ସମାଧାନ: ଆପଣଙ୍କର ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ PCR ସେଟଅପ୍ ପାଇଁ ସର୍ବୋତ୍ତମ ସର୍ତ୍ତ ଖୋଜିବା ପାଇଁ ଏକ ଅପ୍ଟିମାଇଜେସନ୍ ପରୀକ୍ଷଣ କରନ୍ତୁ |

ସଂକ୍ଷେପରେ

ତ୍ରୁଟି ନିବାରଣ aPCR ବିଶ୍ଳେଷଣକାରୀ |ଏକ କଷ୍ଟକର କାର୍ଯ୍ୟ ହୋଇପାରେ, କିନ୍ତୁ ସାଧାରଣ ସମସ୍ୟା ଏବଂ ସେମାନଙ୍କର ସମାଧାନ ବୁ understanding ିବା ଆପଣଙ୍କ PCR ଅଭିଜ୍ଞତାକୁ ଯଥେଷ୍ଟ ବୃଦ୍ଧି କରିପାରିବ | ଏହି ସାଧାରଣ ସମସ୍ୟାର ସମାଧାନ କରି, ଅନୁସନ୍ଧାନକାରୀମାନେ PCR ଫଳାଫଳକୁ ଉନ୍ନତ କରିପାରିବେ ଏବଂ ମଲିକୁଲାର ବାୟୋଲୋଜି ପ୍ରୟୋଗରେ ନିର୍ଭରଯୋଗ୍ୟ ଫଳାଫଳ ନିଶ୍ଚିତ କରିପାରିବେ | ନିୟମିତ ରକ୍ଷଣାବେକ୍ଷଣ, ପୁନ ag ର ଯତ୍ନର ସହିତ ଚୟନ, ଏବଂ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଅବସ୍ଥାର ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ ହେଉଛି ସଫଳ PCR ବିଶ୍ଳେଷଣର ଚାବି |