PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ହସ୍ତକ୍ଷେପ କାରକ |

PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସମୟରେ, କିଛି ବାଧା ସୃଷ୍ଟି କରୁଥିବା କାରଣଗୁଡିକ ପ୍ରାୟତ। ସାମ୍ନାକୁ ଆସିଥାଏ |
PCR ର ଅତ୍ୟଧିକ ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା ହେତୁ, ପ୍ରଦୂଷଣ PCR ଫଳାଫଳକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରୁଥିବା ଅନ୍ୟତମ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ କାରଣ ଭାବରେ ବିବେଚନା କରାଯାଏ ଏବଂ ମିଥ୍ୟା ସକରାତ୍ମକ ଫଳାଫଳ ସୃଷ୍ଟି କରିପାରିବ |
ସମାନ ଉତ୍ସଗୁଡ଼ିକ ହେଉଛି ବିଭିନ୍ନ ଉତ୍ସ ଯାହା ମିଥ୍ୟା-ନକାରାତ୍ମକ ଫଳାଫଳକୁ ନେଇଥାଏ | ଯଦି PCR ମିଶ୍ରଣର ଏକ କିମ୍ବା ଅଧିକ ଅତ୍ୟାବଶ୍ୟକ ଅଂଶ କିମ୍ବା ବର୍ଦ୍ଧିତ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ନିଜେ ପ୍ରତିବନ୍ଧିତ ହୁଏ କିମ୍ବା ଏଥିରେ ବାଧା ସୃଷ୍ଟି ହୁଏ, ତେବେ ଡାଇଗ୍ନୋଷ୍ଟିକ୍ ଆସେରେ ବାଧା ସୃଷ୍ଟି ହୋଇପାରେ | ଏହାଦ୍ୱାରା ଦକ୍ଷତା ହ୍ରାସ ହୋଇପାରେ ଏବଂ ମିଥ୍ୟା ନକାରାତ୍ମକ ଫଳାଫଳ ମଧ୍ୟ ହୋଇପାରେ |
ପ୍ରତିବନ୍ଧକ ସହିତ, ନମୁନା ପ୍ରସ୍ତୁତି ପୂର୍ବରୁ ପରିବହନ ଏବଂ / କିମ୍ବା ସଂରକ୍ଷଣ ଅବସ୍ଥା ହେତୁ ଟାର୍ଗେଟ୍ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ଅଖଣ୍ଡତା ନଷ୍ଟ ହୋଇପାରେ | ବିଶେଷ ଭାବରେ, ଉଚ୍ଚ ତାପମାତ୍ରା କିମ୍ବା ପର୍ଯ୍ୟାପ୍ତ ଷ୍ଟୋରେଜ୍ କୋଷ ଏବଂ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ନଷ୍ଟ ହୋଇପାରେ | ସେଲ୍ ଏବଂ ଟିସୁ ଫିକ୍ସିସନ ଏବଂ ପାରାଫିନ୍ ଏମ୍ବେଡିଂ DNA ବିଭାଜନର ଏକ ଜଣାଶୁଣା କାରଣ ଏବଂ ଏକ ସ୍ଥାୟୀ ସମସ୍ୟା (ଚିତ୍ର 1 ଏବଂ 2 ଦେଖନ୍ତୁ) | ଏହି ପରିସ୍ଥିତିରେ, ସର୍ବୋତ୍କୃଷ୍ଟ ବିଚ୍ଛିନ୍ନତା ଏବଂ ଶୁଦ୍ଧତା ମଧ୍ୟ ସାହାଯ୍ୟ କରିବ ନାହିଁ |

ଚିତ୍ର 1 | DNA ଅଖଣ୍ଡତା ଉପରେ ଅସ୍ଥିରତାର ପ୍ରଭାବ |
ଅଗରୋଜ୍ ଜେଲ୍ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ ଦର୍ଶାଇଲା ଯେ ଶବ ବ୍ୟବଚ୍ଛେଦର ପାରାଫିନ୍ ବିଭାଗରୁ ପୃଥକ ଡିଏନ୍ଏର ଗୁଣ ବହୁତ ଭିନ୍ନ ଥିଲା | ଫିକ୍ସିଂ ପଦ୍ଧତି ଉପରେ ନିର୍ଭର କରି ବିଭିନ୍ନ ହାରାହାରି ଖଣ୍ଡ ଖଣ୍ଡ ଦ s ର୍ଘ୍ୟର DNA ବାହାର କରାଯାଇଥିଲା | ଦେଶୀ ଫ୍ରିଜ୍ ନମୁନାରେ ଏବଂ ବଫର୍ଡ ନିରପେକ୍ଷ ଫର୍ମାଲିନରେ ସ୍ଥିର ହେଲେ DNA ସଂରକ୍ଷଣ କରାଯାଇଥିଲା | ଏକ ଶକ୍ତିଶାଳୀ ଅମ୍ଳୀୟ ବୋଇନ୍ ଫିକ୍ସିଟିଭ୍ କିମ୍ବା ଅବରୋଧିତ, ଫର୍ମିକ୍ ଏସିଡ୍ ଧାରଣ କରିଥିବା ଫର୍ମାଲିନ୍ର ବ୍ୟବହାର DNA ର ବହୁ କ୍ଷତି ଘଟାଇଲା | ଅବଶିଷ୍ଟ ଭଗ୍ନାଂଶ ଅତ୍ୟଧିକ ଖଣ୍ଡବିଖଣ୍ଡିତ |
ବାମ ପାର୍ଶ୍ୱରେ, ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ଦ length ର୍ଘ୍ୟ କିଲୋବାଜ୍ ଯୋଡି (kbp) ରେ ପ୍ରକାଶିତ |

ଚିତ୍ର 2 | | ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ଲକ୍ଷ୍ୟର ଅଖଣ୍ଡତା ହରାଇବା |
(କ) ଉଭୟ ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡରେ ଏକ 3′-5 ′ ବ୍ୟବଧାନ ଲକ୍ଷ୍ୟ DNA ରେ ଏକ ବିରତି ଘଟାଇବ | ଛୋଟ ଖଣ୍ଡରେ DNA ର ସିନ୍ଥେସିସ୍ ଏପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଘଟିବ | ଯଦିଓ, ଯଦି ଡିଏନ୍ଏ ଖଣ୍ଡରେ ଏକ ପ୍ରାଇମର୍ ଆନ୍ଲିଙ୍ଗ୍ ସାଇଟ୍ ଅନୁପସ୍ଥିତ ଥାଏ, ତେବେ କେବଳ ର ar ଖ୍ୟ ବିସ୍ତାର ହୁଏ | ସବୁଠାରୁ ଅନୁକୂଳ କ୍ଷେତ୍ରରେ, ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକ ପରସ୍ପରକୁ ପୁନ at ସ୍ଥାପିତ କରିପାରନ୍ତି, କିନ୍ତୁ ଅମଳ ଛୋଟ ଏବଂ ଚିହ୍ନଟ ସ୍ତରରୁ କମ୍ ହେବ |
) ବର୍ଦ୍ଧିତ ଉଷ୍ମତା ପର୍ଯ୍ୟାୟରେ, ପ୍ରାଇମର୍ସ ମ୍ୟାଟ୍ରିକ୍ସ DNA ରୁ ତରଳି ଯିବ ଏବଂ କମ୍ କଠିନ ପରିସ୍ଥିତିରେ ମଧ୍ୟ ଆନ୍ନାଲ୍ ହେବ ନାହିଁ |
(ଗ) ପାଖାପାଖି ଥିମାଇନ୍ ବେସ୍ ଏକ TT ଡାଇମର୍ ଗଠନ କରେ |
ଅନ୍ୟ ଏକ ସାଧାରଣ ସମସ୍ୟା ଯାହା ପ୍ରାୟତ mol ମଲିକୁଲାର ଡାଇଗ୍ନୋଷ୍ଟିକ୍ସରେ ଘଟିଥାଏ, ଫେନୋଲ୍-କ୍ଲୋରୋଫର୍ମ ନିଷ୍କାସନ ତୁଳନାରେ ଟାର୍ଗେଟ୍ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ର କମ୍-ଅପ୍ଟିମଲ୍ ରିଲିଜ୍ | ଅତ୍ୟଧିକ ପରିସ୍ଥିତିରେ, ଏହା ମିଥ୍ୟା ନକାରାତ୍ମକ ସହିତ ଜଡିତ ହୋଇପାରେ | ଫୁଲିବା ଲାଇସିସ୍ କିମ୍ବା କୋଷ ଆବର୍ଜନାଗୁଡ଼ିକର ଏନଜାଇମାଟିକ୍ ହଜମ ଦ୍ୱାରା ଅନେକ ସମୟ ସଞ୍ଚୟ ହୋଇପାରିବ, କିନ୍ତୁ ପର୍ଯ୍ୟାପ୍ତ ପରିମାଣରେ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ମୁକ୍ତ ହେତୁ ଏହି ପଦ୍ଧତି କମ୍ PCR ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା ସୃଷ୍ଟି କରେ |

ବିସ୍ତାର ସମୟରେ ପଲିମେରେଜ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପର ପ୍ରତିବନ୍ଧକ |

ସାଧାରଣତ ,, ପ୍ରତିବନ୍ଧକଗୁଡିକ ଏକ ଧାରଣକାରୀ ଧାରଣା ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ ଯାହାକି ସବପଟିମାଲ୍ PCR ଫଳାଫଳକୁ ନେଇଥାଏ | ଏକ କଠୋର ବାୟୋକେମିକାଲ୍ ଅର୍ଥରେ, ପ୍ରତିବନ୍ଧକ ଏନଜାଇମର କାର୍ଯ୍ୟକଳାପରେ ସୀମିତ, ଅର୍ଥାତ୍ ଏହା ଡିଏନ୍ଏ ପଲିମେରେଜ୍ କିମ୍ବା ଏହାର କୋଫାକ୍ଟରର ସକ୍ରିୟ ସାଇଟ୍ (ଯେପରିକି ଟାକ DNA ପଲିମେରେଜ୍ ପାଇଁ Mg2 +) ସହିତ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟା ମାଧ୍ୟମରେ ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍-ଉତ୍ପାଦ ପରିବର୍ତ୍ତନକୁ ହ୍ରାସ କରିଥାଏ କିମ୍ବା ପ୍ରତିରୋଧ କରିଥାଏ |
ନମୁନାରେ ଥିବା ଉପାଦାନଗୁଡ଼ିକ କିମ୍ବା ବିଭିନ୍ନ ବଫର୍ ଏବଂ ଏକ୍ସଟ୍ରାକ୍ଟଗୁଡିକ ରେଜେଣ୍ଟ ଧାରଣ କରିଥିବା ସିଧାସଳଖ ଏନଜାଇମକୁ ପ୍ରତିବନ୍ଧିତ କରିପାରେ କିମ୍ବା ଏହାର କୋଫାକ୍ଟରଗୁଡ଼ିକୁ ଫାନ୍ଦରେ ପକାଇପାରେ (ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ EDTA), ଯାହା ଦ୍ the ାରା ପଲିମେରେଜ୍ ନିଷ୍କ୍ରିୟ ହୋଇଯାଏ ଏବଂ ଏହା ବଦଳରେ ହ୍ରାସ କିମ୍ବା ମିଥ୍ୟା ନକାରାତ୍ମକ PCR ଫଳାଫଳକୁ ନେଇଥାଏ |
ଅବଶ୍ୟ, ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଉପାଦାନ ଏବଂ ଲକ୍ଷ୍ୟ ଧାରଣକାରୀ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ମଧ୍ୟରେ ଅନେକ ପାରସ୍ପରିକ କାର୍ଯ୍ୟ ମଧ୍ୟ 'PCR ଇନହିବିଟର' ଭାବରେ ନାମିତ | ଥରେ କୋଷର ଅଖଣ୍ଡତା ବିଚ୍ଛିନ୍ନ ହେବା ଦ୍ୱାରା ବାଧା ପ୍ରାପ୍ତ ହୁଏ ଏବଂ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ମୁକ୍ତ ହୋଇଗଲେ, ନମୁନା ଏବଂ ଏହାର ଆଖପାଖ ସମାଧାନ ଏବଂ କଠିନ ପର୍ଯ୍ୟାୟ ମଧ୍ୟରେ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟା ହୋଇପାରେ | ଉଦାହରଣ ସ୍ .ରୁପ, 'ସ୍କାଭେଞ୍ଜର୍ସ' ଅଣ-କୋଭାଲାଣ୍ଟ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟା ମାଧ୍ୟମରେ ଏକକ କିମ୍ବା ଦୁଇ-ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡେଡ୍ DNA କୁ ବାନ୍ଧିପାରେ ଏବଂ PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପାତ୍ରରେ ପହଞ୍ଚୁଥିବା ଲକ୍ଷ୍ୟ ସଂଖ୍ୟା ହ୍ରାସ କରି ବିଚ୍ଛିନ୍ନତା ଏବଂ ଶୁଦ୍ଧକରଣରେ ହସ୍ତକ୍ଷେପ କରିପାରିବ |
ସାଧାରଣତ ,, କ୍ଲିନିକାଲ୍ ଡାଇଗ୍ନୋଷ୍ଟିକ୍ ପରୀକ୍ଷା (ମୂତ୍ରରେ ୟୁରିଆ, ହେମୋଗ୍ଲୋବିନ୍ ଏବଂ ରକ୍ତରେ ହେପାରିନ୍), ଖାଦ୍ୟପେୟ ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟସ୍ (ଜ organic ବ ଉପାଦାନ, ଗ୍ଲାଇକୋଜେନ୍, ଫ୍ୟାଟ୍, Ca2 + ଆୟନ) ଏବଂ ପରିବେଶରେ ଉପାଦାନ (ଫେନୋଲ୍) ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ଅଧିକାଂଶ ଶରୀରର ତରଳ ପଦାର୍ଥ ଏବଂ ରେଜେଣ୍ଟରେ PCR ନିରୋଧକ ଉପସ୍ଥିତ | , ଭାରୀ ଧାତୁ)

ବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆ ଏବଂ ଇଉକାରିଓଟିକ୍ କୋଷ, ଲକ୍ଷ୍ୟହୀନ DNA, ଟିସୁ ମ୍ୟାଟ୍ରିକ୍ସର DNA- ବାନ୍ଧୁଥିବା ମାକ୍ରୋମୋଲ୍ୟୁକୁଲ୍ ଏବଂ ଗ୍ଲୋଭସ୍ ଏବଂ ପ୍ଲାଷ୍ଟିକ୍ ପରି ଲାବୋରେଟୋରୀ ଉପକରଣରେ ଅଧିକ ବିସ୍ତାରିତ PCR ଇନହିବିଟର ମିଳିପାରିବ | ନିଷ୍କାସନ ସମୟରେ କିମ୍ବା ପରେ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡଗୁଡିକର ଶୁଦ୍ଧତା ହେଉଛି PCR ଇନହିବିଟରଗୁଡିକ ଅପସାରଣ ପାଇଁ ପସନ୍ଦିତ ପଦ୍ଧତି |
ଆଜି, ବିଭିନ୍ନ ସ୍ୱୟଂଚାଳିତ ନିଷ୍କାସନ ଉପକରଣ ଅନେକ ମାନୁଆଲ୍ ପ୍ରୋଟୋକଲ୍ ବଦଳାଇପାରେ, କିନ୍ତୁ 100% ପୁନରୁଦ୍ଧାର ଏବଂ / କିମ୍ବା ଲକ୍ଷ୍ୟଗୁଡିକର ଶୁଦ୍ଧତା କଦାପି ହାସଲ ହୋଇପାରି ନାହିଁ | ସମ୍ଭାବ୍ୟ ନିଷ୍କ୍ରିୟକାରୀମାନେ ଶୁଦ୍ଧ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ରେ ଉପସ୍ଥିତ ଥାଇପାରନ୍ତି କିମ୍ବା ଏହା କାର୍ଯ୍ୟକାରୀ ହୋଇଥାଇପାରେ | ଇନହିବିଟରର ପ୍ରଭାବକୁ କମାଇବା ପାଇଁ ବିଭିନ୍ନ ରଣନୀତି ବିଦ୍ୟମାନ | ଉପଯୁକ୍ତ ପଲିମେରେଜ୍ ଚୟନ ପ୍ରତିବନ୍ଧକ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଉପରେ ଏକ ମହତ୍ impact ପୂର୍ଣ୍ଣ ପ୍ରଭାବ ପକାଇପାରେ | PCR ପ୍ରତିବନ୍ଧକକୁ ହ୍ରାସ କରିବା ପାଇଁ ଅନ୍ୟ ପ୍ରମାଣିତ ପଦ୍ଧତିଗୁଡ଼ିକ ହେଉଛି ପଲିମେରେଜ୍ ଏକାଗ୍ରତା କିମ୍ବା BSA ପରି ଯୋଗୀ ପ୍ରୟୋଗ |
ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ ପ୍ରକ୍ରିୟା ଗୁଣବତ୍ତା ନିୟନ୍ତ୍ରଣ (IPC) ବ୍ୟବହାର ଦ୍ୱାରା PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟାଗୁଡ଼ିକର ପ୍ରତିବନ୍ଧକ ପ୍ରଦର୍ଶନ କରାଯାଇପାରେ |
ପୁଙ୍ଖାନୁପୁଙ୍ଖ ଧୋଇବା ଦ୍ by ାରା ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ଠାରୁ ଇଥାନଲ୍, EDTA, CETAB, LiCl, GuSCN, SDS, ଆଇସୋପ୍ରୋପାନୋଲ୍ ଏବଂ ଫେନୋଲ୍ ପରି ନିଷ୍କାସନ କିଟ୍ ରେ ଥିବା ସମସ୍ତ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ସମାଧାନ ଅପସାରଣ ପାଇଁ ଯତ୍ନବାନ ହେବା ଆବଶ୍ୟକ | ସେମାନଙ୍କର ଏକାଗ୍ରତା ଉପରେ ନିର୍ଭର କରି, ସେମାନେ PCR କୁ ସକ୍ରିୟ କିମ୍ବା ପ୍ରତିରୋଧ କରିପାରନ୍ତି |